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凝胶过滤(分子筛层析或凝胶层析)原理和实验方法

发布时间:2013-09-23   点击次数:5136次

凝胶层析又称为分子筛层析或凝胶过滤。具有分子筛作用的物质很多,如浮石、琼脂 、琼脂 糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。以葡聚糖凝胶应用zui广,商品名是sephadex型号很多,从G10 到G200 ,它的主要应用范围是:①分级分离各种抗原与抗体 ;② 去掉复合物中的小分子物质。如除盐、荧光素和游离的放射性同位素 以及水解的蛋白质碎片;③分析血清 中的免疫复合物;④分子量的测定。
(一)原理
凝胶是一种多孔性的不带表面电荷的物质,当带有多种成分的样品溶液在凝胶内运动时,由于它们的分子量不同而表现出速度的快慢,在缓冲液洗脱时,分子量大的物质不能进入凝胶孔内,而在凝胶间几乎是垂直的向下运动,而分子量小的物质则进入凝胶孔内进行“绕道”运行,这样就可以按分子量的大小,先后流出凝胶柱,达到分离的目的。
(二)葡聚糖凝胶的种类与性能
葡聚糖又名右旋糖酐,在它们的长链间以三氯环氧丙烷交联剂交联而成。葡聚糖凝胶具有很强的吸水性,交联度大,吸水性小,相反交联度小,吸水性大。商品名以SephadexG表示,G值越小,交联度越大,吸水性越小,G值越大,交联度越小,吸水性就越大,二者呈反比关系,G值大约为吸水量的10倍。由此可以根据床体积而估算出葡聚糖凝胶干粉的用量。
表 1-8 Sephadex1的种类与特性

G25 、G50 有四种颗粒型号:粗(100µ~300µ)、中(50µ~150µ)、细(20µ~80µ)和超细(10µ~40µ)。G75 ~G200 又有两种颗粒型号:中(40µ~120µ),超细(10µ~40µ)。颗粒越细,流速越慢,分离效果越好。
表1-9 DEAE-纤维素与 Sephadex1比较

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