技术文章您的位置:网站首页 >技术文章 >Northern 和 Southern Blotting,以及 Colony 和 Plaque Lifts

Northern 和 Southern Blotting,以及 Colony 和 Plaque Lifts

发布时间:2012-03-19   点击次数:3084次

Immobilon-Ny+ 带正电尼龙转印膜和Immobilon-NC 转印膜

Millipore 提供了一种用于核酸应用转印膜选择。 使用带正电的 Immobilon-Ny+ 转印膜可以在 Southern blotting,Northern blotting 和 colony/plaque lifts 实验中获得出色的结果。 Immobilon-NC 转印膜,是主要的 Southern 和 colony/plaque 实验方案中zui初使用的膜,也可作为一种灵敏度较低但更经济的选择。

Immobilon-Ny+ 带正电尼龙转印膜

Immobilon-Ny+ 是一种带正电的尼龙转印膜,非常适合于可靠与可重现的转移、固定、杂交及随后的重复杂交实验。 其表面均一分布的正电荷密度确保得到zui高的灵敏度和zui低的背景信号。 此膜经强化处理具有超长的耐久性,这一点对于重复杂交试验至关重要。

可提供详细的实验方案,在使用 Immobilon-Ny+ 转印膜时可用于优化转印结果。


 

  • 灵敏度zui高,而背景信号zui小
     
  • 非常出色的重复杂交特性
     
  • 在化学发光法和放射性检测系统中均表现出色

 

性能

Southern Blotting

直接比较三种带正电尼龙膜在各自优化实验方案下的表现:每种膜在其推荐的紫外波长照射下交联。 Immobilon-Ny+ 转印膜的杂交信号是其它两种膜的 2 倍。

直接比较三种带正电尼龙膜在各自优化实验方案下的表现:每种膜在其推荐的紫外波长照射下交联。 Immobilon-Ny+ 转印膜的杂交信号是其它两种膜的 2 倍。

12 次重复杂交之后的信号强度

尼龙膜在254 nm 交联,并进行了多次重复杂交,依次为:用 <sup>32</sup>P 标记探针做 2 次杂交,4 次模拟杂交,用<sup>32</sup>P 标记探针做第 7 次杂交,然后进行 5 次模拟杂交以及用 <sup>32</sup>P 标记探针做第 13 次杂交。 在每个杂交周期之间,将膜置于 0.4M NaOH 溶液中,在 45°C 下洗提 30 分钟。 模拟杂交与真实杂交完全一样,区别在于未加 <sup>32</sup>P 标记探针。 在整个重复杂交过程中,Immobilon-Ny+ 的信号强度是竞争产品 A 和 B 的两倍。

尼龙膜在 254 nm 交联,并进行了多次重复杂交,依次为:用 32P 标记探针做 2 次杂交,4 次模拟杂交,用 32P 标记探针做第 7 次杂交,然后进行 5 次模拟杂交以及用 32P 标记探针做第 13 次杂交。 在每个杂交周期之间,将膜置于 0.4M NaOH 溶液中,在 45°C 下洗提 30 分钟。 模拟杂交与真实杂交完全一样,区别在于未加 32P 标记探针。 在整个重复杂交过程中,Immobilon-Ny+ 的信号强度是竞争产品 A 和 B 的两倍。

检测灵敏度

将凝胶上 DNA 的量减少到 0.01 ng。 0.1 lane(条带)中的 2.2 和 2.0 kbp 带分别与 DNA 的 0.48 和0.42 pg 相对应。 大约相当于 10 µg 人类基因组 DNA 中一个单拷贝基因序列。 可通过对探针浓度加倍来提高灵敏度。 在0.01 ng 条带中,与竞争产品 A 相比,Immobilon-Ny+ 转印膜灵敏度稍高,而背景信号更低。

将凝胶上 DNA 的量减少到 0.01 ng。 0.1 lane(条带)中的 2.2 和 2.0 kbp 带分别与 DNA 的 0.48 和 0.42 pg 相对应。 大约相当于 10 µg 人类基因组 DNA 中一个单拷贝基因序列。 可通过对探针浓度加倍来提高灵敏度。 在 0.01 ng 条带中,与竞争产品 A 相比,Immobilon-Ny+ 转印膜灵敏度稍高,而背景信号更低。

用化学发光检测进行 Northern Blotting

鼠肝的全部 RNA(1 µg) 在甲醛琼脂糖凝胶中电泳分离,然后通过毛细作用转印到 Immobilon-Ny+ 转印膜和竞争产品带正电尼龙膜 “A”。 与烘焙相比,通过紫外交联固定RNA 能增强信号。 Immobilon-Ny+ 转印膜比竞争产品 A 表现出更高的灵敏度。

鼠肝的全部 RNA (1 µg) 在甲醛琼脂糖凝胶中电泳分离,然后通过毛细作用转印到 Immobilon-Ny+ 转印膜和竞争产品带正电尼龙膜 “A”。 与烘焙相比,通过紫外交联固定RNA 能增强信号。 Immobilon-Ny+ 转印膜比竞争产品 A 表现出更高的灵敏度。

Colony Lifts

将载有 pUC19或 pLH2(2.0 kbp λ 噬菌体 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19)的 JM109 混合细菌悬浮液置于琼脂培养皿中,在 37°C 下培养过夜。 将培养皿在 4°C 下冷却30 分钟,将菌落(直径大约 1–2 mm)转印至一片 82 mm 直径的Immobilon-Ny+ 圆片膜上,或转印至竞争产品带正电的尼龙膜上。 膜上的 DNA 在254 nm, 60,000 µJoules/cm<sup>2</sup> 紫外光照射下 交联。 然后用 a <sup>32</sup>P 标记的 DNA 探针对膜进行杂交,并使用磷屏成像系统显色。

将载有 pUC19 或 pLH2(2.0 kbp λ 噬菌体 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19)的 JM109 混合细菌悬浮液置于琼脂培养皿中,在 37°C 下培养过夜。 将培养皿在 4°C 下冷却30 分钟,将菌落(直径大约 1– 2 mm)转印至一片 82 mm 直径的 Immobilon-Ny+ 圆片膜上,或转印至竞争产品带正电的尼龙膜上。 膜上的 DNA 在 254 nm, 60,000 µJoules/cm2 紫外光照射下 交联。 然后用 a 32P 标记的 DNA 探针对膜进行杂交,并使用磷屏成像系统显色。

Immobilon-NC 转印膜

Immobilon-NC 转印膜是一种经济型选择,用于核酸和蛋白质印迹实验方案。 这种转印膜是 Southern、colony/plaque 以及蛋白质实验方案中zui初使用的膜。 NC HATF 所含的混合纤维素酯基质,不含在细胞生长过程中会干扰细胞壁完整性的表面活性剂。 这些膜用于 colony lifts。 NC HAHY 所含的混合纤维素酯基质,所带的表面活性剂能够增强可湿性以及转印过程中的处理能力。 两种膜对核酸和蛋白质都具有高吸附容量。 适用于常规转印。

订购信息:

Immobilon-Ny+ 转印膜 – 圆片滤膜
 

比较 目录编号 滤膜直径,mm 数量/包装  
  INYC08250 82 50
 
  INYC08550 85 50
 
  INYC13250 132 50
 
  INYC13750 137 50
 

Immobilon-NC 不含表面活性剂的转印膜 – 圆片滤膜
 

比较 目录编号 滤膜直径,mm 数量/包装  
  HATF08250 82 50
 
  HATF08550 85 50
 
  HATF13250 132 50
 
  HATF13750 137 50
 

Immobilon-NC 转印膜 – 圆片滤膜
 

  目录编号 滤膜直径,mm 数量/包装  
  HAHY08250 82 50
 
  HAHY08550 85 50
 
  HAHY13750 137 50
 

Immobilon-Ny+ 转印膜 – 片和卷
 

比较 目录编号 滤膜尺寸,cm x cm 数量/包装  
  INYC61150 6 x 11 50
 
  INYC09120 9 x 12 10
 
  INYC10100 10 x 10 10
 
  INYC15150 15 x 15 10
 
  INYC20200 20 x 20 10
 
  INYC22220 22.2 x 22.2 10
 
  INYC2222C 22.2 x 22.2 100
 
  INYC26260 26 x 26 10
 
  INYC00010 30 x 330 1
 

Immobilon-NC 转印膜 – 片和卷
 

比较 目录编号 滤膜尺寸,cm x cm 数量/包装  
  HAHY304F0 30 x 30 10
 
  HATF00010 33 x 300 1
 

联系我们

contact us

咨询电话

15216781845

扫一扫,关注我们

返回顶部




扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站